ABSTRACT
Un paso crucial en el desarrollo de un inmunosensor piezoeléctrico para la detección de tuberculosis (TB), es la selección y obtención de los inmunoreactivos empleados en el inmunoensayo y la estrategia para la biofuncionalización del transductor. Diversos estudios han reportado el uso del antígeno proteico 38kDa (Ag38kDa) de Mycobacterium tuberculosis (Mtb) como un buen biomarcador de la enfermedad y el cumplimiento de las características físicas y bioquímicas para ser inmovilizado por monocapas autoensambladas (SAMs), en la superficie del electrodo de oro de cristales piezoeléctricos. Un inmunosensor piezoeléctrico desarrollado a partir de un antígeno nativo purificado de Mtb podría ser un método alternativo simple para la detección de Mtb con ventajas de rapidez y reusabilidad, contribuyendo al control y el tratamiento oportuno de la enfermedad. En este estudio se presenta el proceso de purificación del Ag38kDa a partir de proteínas de secreción filtradas de cultivo (CFP) de Mtb para ser usado como inmunoreactivo con potencial aplicación en la detección de Mtb con inmunosensores piezoeléctricos. Se obtuvieron cristales funcionalizados mediante la técnica modificada de monocapas autoensambladas (SAMs), con el antígeno nativo purificado y CFP. Las superficies biofuncionalizadas fueron caracterizadas cualitativamente con microscopía de fuerza atómica (AFM) para validar las condiciones de optimización del protocolo de inmovilización con antígenos de secreción de Mtb. Estos cristales modificados pueden ser acoplados a un sistema de caracterización de un inmunosensor piezoeléctrico para la detección de Mtb mediante un inmunoensayo competitivo directo.
The selection and procurance of the immunoreagents used in the immunoassay and biofunctionalisation transducer strategy, are a key in the piezoelectric immunosensor development for the detection of tuberculosis (TB). Many have reported the use of 38kDa protein antigen (Ag38kDa) from Mycobacterium tuberculosis (Mtb) such as good biomarker of TB disease and compliance with physical and biochemical characteristics to be immobilized by self-assembled monolayers (SAMs), in the gold electrode of piezoelectrics crystals surfaces. A piezoelectric immunosensor developed from purified native antigens of Mtb may be an alternative simple method for detection of Mtb with speed and reusable advantages, contributing to the control and early treatment of disease. In this paper, the purification process of Ag38kDa Mtb from secretory proteins filtered culture (CFP) from Mtb is presented as an immunoreactive with potential application in the detection of Mtb by piezoelectric immunosensors. Functionalized crystals were obtained by using the modified self-assembled monolayers (SAMs) technique, with purified native antigen and CFP. The functionalized surfaces were qualitatively characterized using atomic force microscopy (AFM) in order to validate the immobilization protocol optimal conditions for secretion antigens from Mtb. These modified crystals may be coupled to piezoelectric immunosensor characterization system for detecting of Mtb by a direct competition immunoassay.
ABSTRACT
Aim: Slow growth rate in culture renders the traditional isolation, identification, and drug susceptibility testing of clinically important mycobacteria inadequate when there is an urgent need for a precise diagnosis in order to initiate patient treatment. Molecular methods all rely on mycobacterial DNA isolation which in turn has become an essential step of the process. Our study aimed to evaluate DNA isolation protocols from mycobacteria of clinical interest. Methods: Therefore, in order to determine an optimal method we evaluated 8 inexpensive, rapid and easy DNA isolation methods from 30 mycobacterial cultures (10 Mycobacterium tuberculosis and 20 Non-tuberculous Mycobacteria) for subsequent direct detection by PCR. Results: Six of those 8 methods reliably allow the isolation of good DNA yields and quality, the optimal protocol being the one that includes a 1% Triton X-100 lysis solution. Protocols using SDS 1% as a lysis solution did not yield DNA suitable for PCR amplification. Conclusion: Six of the methods we evaluated can easily be implemented in resource limited settings for routine use, potentially contributing to a better management of mycobacterial infections.
ABSTRACT
El programa SENTRY es una red de laboratorios alrededor del mundo, que vigila la prevalencia de patrones de sensibilidad / resistencia antimicrobiana en bacterias causantes de infecciones hospitalarias y de la comunidad. Este reporte resume los datos reunidos en 1997 por un laboratorio de referencia en Medellín. Los aislamientos (uno por paciente) fueron de bacteremias, neumonía, heridas de piel y tejidos blandos e infecciones urinarias. La identificación y pruebas de sensibilidad se realizarón en el laboratorio local y se confirmaron por el laboratorio coordinador en la Universidad de Iowa. Las pruebas de sensibilidad en este laboratorio se realizaron a cefalosporinas, betalactámicos, macrólidos, fluoroquinolonas, aminoglucósidos etc., utilizando microdilución en caldo. Fueron recolectados 212 aislamientos, los más frecuentes fueron: Escherichia coli (25.0 por ciento), responsible de la mayoría de las bacteremias, infecciones del tracto respiratorio inferior y tracto urinario; y Staphylococcus aureus (14.2 por ciento) obtenido de la mayoría de las infecciones de piel y tejidos blandos. La sensibilidad en bacilos gram negativos fue en su orden: imipenem (99.1 por ciento) > cefepime (92.5 por ciento) > amikacina (89.6 por ciento) > ciprofloxacina = ceftazidima = gatifloxacina = levofloxacina (88.7 por ciento) > gentamicina = trovafloxacina (87.7 por ciento) > aztreonam (85.8 por ciento) > ceftriaxona (80.2 por ciento) > piperacilina / tazobactam (77.4 por ciento) > tobramicina (76.4 por ciento) > cefuroxima (56.6 por ciento) > cefazolina (45.3 por ciento). Se encontraron aislamientos de klebsiella spp y E coli productores de betalactamasas de espectro extendido (BLEE) y una frecuenciaq alta de resistencia a fluoroquinolonas. 16.7 por ciento de Sa Aureus de resistente a oxacilina. Un aislamiento de enterococo tuvo sensibilidad intermedia a vancomicina. Estos datos pueden servir de referencia para futuros estudios y permitir la vigilancia de las tendencias de resistencia en Colombia en comparación con otros países de America Latina y el mundo
Subject(s)
Cross Infection/microbiology , Drug Resistance, Microbial , Epidemiological MonitoringABSTRACT
El presente estudio tuvo como objetivo estudiar la eficacia y seguridad de la claritromicina en pacientes de 10 o más años de edad con diagnóstico de amigdalofaringitis aguda estreptocóccica. De 188 pacientes estudiados, 43 (22.8%) tuvieron la prueba rápida (Test Pack Strep A) y el cultivo positivo para Streptococcus pyogenes; 40 fueron tratados con claritromicina a una dosis de 250 mgs/12 horas/10 días. Todas las cepas de S. pyogenes identificadas resultaron ser sensibles In vitro a este nuevo macrólido. En la evaluación clínica, 5-7 días post-tratamiento, 39 (97%) estaban clínicamente curados y el restante presentó mejoría. La evaluación bacteriológica demostró erradicación de la bacteria en 37 (92.5%) y persistencia o recaída en los 3 restantes. Se presentaron pocos efectos adversos y ninguno de ellos obligó a suspender el tratamiento. La claritromicina resultó ser efectiva y bien tolerada en el tratamiento de la amigdalofaringitis aguda estreptocóccica.